AM1344 mMESSAGE mMACHINE? T7 轉(zhuǎn)錄試劑盒
Invitrogen?
mMESSAGE mMACHINE? T7 轉(zhuǎn)錄試劑盒
貨號(hào): AM1344
產(chǎn)品概述
mMESSAGE mMACHINE? 試劑盒設(shè)計(jì)用于體外合成大量的加帽 RNA。加帽 RNA 可模擬體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的大多數(shù)真核 mRNA，因?yàn)槠湓?5' 末端有一個(gè) 7-甲基鳥苷帽結(jié)構(gòu)。
mMESSAGE mMACHINE? 試劑盒反應(yīng)包括超高得率轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中的帽類似物 [m7G(5')ppp(5')G]。帽類似物僅作為轉(zhuǎn)錄本的第一個(gè)或 5' 末端 G 摻入，因?yàn)槠浣Y(jié)構(gòu)使得無法在 RNA 分子中的其他位點(diǎn)將其摻入。
mMESSAGE mMACHINE? 試劑盒工作原理
mMESSAGE mMACHINE? 試劑盒有簡(jiǎn)化的反應(yīng)形式，其中所有 4 種核糖核苷酸和帽類似物混合于單一溶液中。該溶液的帽類似物:GTP 比值為 4:1，這適用于盡可能提高 RNA 得率和加帽轉(zhuǎn)錄本比例。
mMESSAGE mMACHINE? 試劑盒適用于卵母細(xì)胞顯微注射用加帽 RNA 常規(guī)合成、體外翻譯、轉(zhuǎn)染和其他應(yīng)用。在存在高核苷酸濃度的情況下，通過優(yōu)化 RNA 合成的反應(yīng)條件來實(shí)現(xiàn)高得率。
此外，合成的 RNA 不會(huì)被任何可能含有 RNase 抑制劑（酶混合物的組成部分）的污染性核糖核酸酶降解。
使用 mMESSAGE mMACHINE? 試劑盒
在 20 μL 反應(yīng)中，在 2 小時(shí)孵育期間，mMESSAGE mMACHINE? 高得率加帽 RNA 轉(zhuǎn)錄將生成大量的加帽 RNA。該方法獲得的得率為使用常規(guī)體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的 10–50 倍。
帽類似物與 GTP 的比值已經(jīng)過優(yōu)化，能夠在得率 (15–35 μg) 與加帽轉(zhuǎn)錄本的比例 (80%) 之間實(shí)現(xiàn)良好折衷。mMESSAGE mMACHINE? 試劑盒還包含一份 LiCl 沉淀溶液，該溶液可高效分離來自加帽 RNA 的蛋白和未摻入的核苷酸（包括游離帽類似物），提高翻譯效率。
mMESSAGE mMACHINE? 試劑盒僅針對(duì)與試劑盒中包含的聚合酶配合使用進(jìn)行了優(yōu)化。使用不同的聚合酶可能會(huì)導(dǎo)致得率低。mMESSAGE mMACHINE? 試劑盒包含 25 次轉(zhuǎn)錄反應(yīng)所需的所有緩沖液和試劑。
使用試劑盒提供的對(duì)照模板（非洲蟾蜍延伸因子 1α，pTRI Xef），每次 mMESSAGE mMACHINE? 反應(yīng)將使用 T3 或 T7 RNA 聚合酶生成約 20–30 μg 的 RNA，或使用 SP6 RNA 聚合酶生成約 15–25 μg RNA。
規(guī)格
最終產(chǎn)品類型
合成 mRNA, mRNA
產(chǎn)品規(guī)格
試劑盒
樣品類型
mRNA, 合成 mRNA
適用于（應(yīng)用）
In Vitro Transcription, synthetic mRNA, mRNA, transfection, LNPs, GENEart, linearized DNA plasmid, delivery, PCR products
反應(yīng)次數(shù)
25 次反應(yīng)
產(chǎn)品線
Ambion?、mMESSAGE mMACHINE?
產(chǎn)品類型
T7 體外轉(zhuǎn)錄試劑盒
數(shù)量
25 次反應(yīng)
促進(jìn)劑
T7
運(yùn)輸條件
干冰
產(chǎn)量
20-30 μg
原始材料
PCR 產(chǎn)物、線性化 DNA 質(zhì)粒
內(nèi)容與儲(chǔ)存
T7 酶混合物、10X 反應(yīng)緩沖液 2XNTP?CAP 溶液、GTP 溶液、pTRI-Xef、TURBO DNase、醋酸銨終止液、氯化鋰沉淀溶液和凝膠上樣緩沖液 II 均儲(chǔ)存在 –20°C 下?？稍谌魏螠囟认聝?chǔ)存無核酸酶水。
電話：020-29842979
傳真：020-29842979