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該文章轉(zhuǎn)載自：莫納生物

眾所周知，逆轉(zhuǎn)錄是 RT-PCR 實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵一步，逆轉(zhuǎn)錄酶也是此步驟中不可或缺的“靈魂角色”，那么，小伙伴們對(duì)它們是否有著充分的了解呢？

今天，莫納生物逆轉(zhuǎn)錄系列知識(shí)科普正式開(kāi)啟！本系列共分為三部分，這一期，琴子將為您帶來(lái)第一部分——酶的發(fā)現(xiàn)、逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程及 M-MLV 與 AMV 的區(qū)別。

接下來(lái)就請(qǐng)與我一同走進(jìn)逆轉(zhuǎn)錄的世界吧！

逆轉(zhuǎn)錄的實(shí)驗(yàn)?zāi)康木褪且咝У孬@得 cDNA，要達(dá)成這個(gè)目的，就要考慮如何選擇試劑。而在試劑選擇中，酶的選擇是非常關(guān)鍵的。

逆轉(zhuǎn)錄酶，全稱(chēng)是依賴(lài)于 RNA 的 DNA 聚合酶，最早發(fā)現(xiàn)于部分 RNA 病毒中，具有逆轉(zhuǎn)錄活性，能夠以單鏈 RNA 為模板合成 DNA 的酶。

逆轉(zhuǎn)錄酶最初是在 1970 年由霍華德·馬丁·特明（Howard Temin）和戴維·巴爾的摩（David Baltimore）從 RNA 病毒中發(fā)現(xiàn)的。他們并因此獲得 1975 年度諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。

人類(lèi)免疫缺陷病毒1型的逆轉(zhuǎn)錄酶（PDB：HIV）

莫洛尼鼠白血病病毒的逆轉(zhuǎn)錄酶（MMLV）

禽成髓細(xì)胞瘤病毒的逆轉(zhuǎn)錄酶 （AMV）

維持真核細(xì)胞的染色體端粒存在的端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶

AMV 和 MMLV 是分子 PCR 檢測(cè)常用的兩種逆轉(zhuǎn)錄酶。AMV 反轉(zhuǎn)錄酶來(lái)源于禽類(lèi)的病毒，RNaseH 活性較高，一邊做反轉(zhuǎn)錄，一邊就把 RNA 降解了，所以 AMV 反轉(zhuǎn)錄酶的反轉(zhuǎn)錄效率比較低。M-MLV 反轉(zhuǎn)錄酶來(lái)源于鼠類(lèi)，它的 RNaseH 活性較低，所以反轉(zhuǎn)錄效率是比較高的。雖然野生型 M-MLV 逆轉(zhuǎn)錄酶的熱穩(wěn)定性差，抵抗二級(jí)結(jié)構(gòu)的能力弱，但可以通過(guò)基因改造彌補(bǔ)這些不足。

（野生型）M-MLV 和 AMV 的區(qū)別

我們知道逆轉(zhuǎn)錄酶由不同生化活性的不同結(jié)構(gòu)酶組成，其中逆轉(zhuǎn)錄活性和 RNaseH 活性決定了逆轉(zhuǎn)錄酶的性能。逆轉(zhuǎn)錄活性與酶的熱穩(wěn)定性密切相關(guān)。

下一期，我將帶大家詳細(xì)了解逆轉(zhuǎn)錄酶 RNaseH 活性和熱穩(wěn)定性對(duì)逆轉(zhuǎn)錄的影響，以及如何選擇逆轉(zhuǎn)錄酶，大家敬請(qǐng)期待吧！

莫納生物逆轉(zhuǎn)錄酶具有高熱穩(wěn)定性，較低 RNase H 活性，大幅提升了逆轉(zhuǎn)錄效率和 RNA 復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的耐受性，特異性更好、產(chǎn)率更高、更容易獲得全長(zhǎng) cDNA，最長(zhǎng)可達(dá) 12kb。

莫納生物一步法與兩步法產(chǎn)品的區(qū)別

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