此文章轉載自:Monad莫納生物
不同來源樣本核酸提取純化難點
DNA 與組蛋白構成核小體,進一步與非組蛋白形成染色體,染色體存在于細胞核中,外有核膜和細胞膜。從組織中提取核酸需破碎細胞膜及核膜,使染色體釋放,同時去除蛋白質。此外,在纖維組織、脂肪、脾臟等組織中存在豐富的核酸酶,這也給組織核酸的提取帶來了挑戰(zhàn)。
血液中的血紅素會影響到 Taq 酶,從而抑制 PCR 反應;抗凝劑的添加、抗凝是否完全、冷藏時間長短及凍融次數(shù)均會影響血液 DNA 提取的濃度和純度。
糞便中不僅含有大量的腸道微生物,還可能含有未消化的食物、消化酶、粘液、膽堿、植物多糖等,這些雜質不僅增加了 DNA 提取的難度,也影響到下游實驗。
植物細胞中多種成分影響到核酸的提取。裂解產物中的多酚類氧化后易形成醌類物質,其可與核酸發(fā)生不可逆的結合;多糖類物質能抑制限制性內切酶、連接酶、聚合酶等活性,影響下游實驗,因此在前期提取過程中,需將其去除完全,但多糖類物質易與核酸共沉淀,難以去除。
除少數(shù)細菌如產甲烷細菌這類古細菌的細胞壁是由其他化學物質組成外,幾乎所有細菌的細胞壁都含有肽聚糖,多糖類物質在核酸提取過程中較難去除。此外,細菌復雜的細胞壁結構,也給細菌核酸提取造成困擾。
樣本提取影響因素如此復雜,
提取試劑盒還需謹慎選擇?
既要裂解能力強,又要純度高?
既要提取濃度高,又要提取模板完整?
既要操作簡單,又要樣本兼容性好?
莫納新品
快速通用基因組DNA提取試劑盒
(MI00101S)
一招全解決!
新品性能展示
分別使用莫納 MI00101-快速通用型基因組 DNA 提取試劑盒和市場上常見的同類產品,同時提取小鼠肌肉、小鼠腎臟、豬血、大腸桿菌、夾竹桃葉片,采用莫納 Eva 3200超微量核酸蛋白檢測儀對產物純度進行檢測,從圖表中可以看出,莫納 MI00101-快速通用型基因組 DNA 提取試劑盒提取不同樣本的模板純度高,可直接應用于下游實驗。
使用莫納 MI00101-快速通用型基因組 DNA 提取試劑盒分別提取小鼠肌肉和大腸桿菌,并進行瓊脂糖凝膠電泳,從下圖可以看出莫納 MI00101-快速通用型基因組 DNA 提取試劑盒提取所得 DNA 完整性好。
20 mg 小鼠肌肉,上樣量 2 μl;M 為 D2000 Plus Marker
1.5 ml 大腸桿菌 DH5α,上樣量 1 μl;M 為 D2000 Plus Marker
使用莫納 MI00101-快速通用型基因組 DNA 提取試劑盒提取 1.5 ml 大腸桿菌菌液、100 mg 夾竹桃葉片、20 mg 小鼠肌肉、10 mg 小鼠腎臟和 200 μl 豬血,電泳結果顯示,該款試劑盒樣本適用范圍廣,可有效提取動物、植物、細菌等多類型樣本。
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