作為生物科研人，RNA 提取想必是大部分人都會(huì)涉及到的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)，但你還在用傳統(tǒng)的Trizol 法提取 RNA 嗎？Trizol 法的關(guān)鍵步驟是加入氯仿，離心進(jìn)行分相，一涉及到氯仿，事情就變得麻煩了起來(lái)。
氯仿，又叫三氯甲烷 ( CHCl3），有中等毒性，可以經(jīng)消化道、呼吸道、皮膚接觸進(jìn)入機(jī)體，現(xiàn)在管控嚴(yán)格，非常不容易購(gòu)買(mǎi)。因?yàn)槁确露诡^爛額的科研 er 們，是時(shí)候該拋棄它啦！
莫納生物推出升級(jí)款RNA抽提試劑
Monzol? Reagent Pro
｜產(chǎn)品特點(diǎn)｜
■ 提取過(guò)程不使用氯仿等有毒試劑
■ 全程室溫操作，簡(jiǎn)單方便
■ 一盒多用，兼容總 RNA、miRNA和大片段 RNA 的分離純化
■ 適用樣本范圍廣，包含各種動(dòng)物組織和體液、植物、培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、酵母、病毒樣品等
｜提取效果展示｜
不同樣本 RNA 提取效果圖
不同品牌提取 RNA 的濃度圖
不同品牌提取 RNA 的 gDNA 殘留量
說(shuō)到這里，可能大家還是會(huì)好奇，不用氯仿怎么才能完成 RNA 提取呢？小編今天就以使用Monzol? Reagent Pro 提取組織樣本中總 RNA 為例，帶大家詳細(xì)了解一下操作步驟及注意事項(xiàng)吧~
總RNA提取示意圖
具體流程如下：
01
樣本前處理
在研缽中用液氮將約 100~200 mg 組織研磨至粉末狀，用液氮預(yù)冷過(guò)的 1.5 mL離心管稱取 25~100 mg 組織，加入500 μL Monzol ? Reagent Pro試劑（注意盡量在組織粉末尚未融化前加入），蓋上管蓋用力搖晃混合均勻。
研磨組織
每管加入500 μL Monzol ? Reagent Pro
02
總RNA提取
1）加入200 μL RNase-free水，用力搖晃15秒，13,000 rpm (11,750 g) 離心15分鐘。
注意全程常溫離心，否則可能會(huì)因?yàn)榈蜏囟鴮?dǎo)致Monzol? Reagent Pro試劑渾濁分相
2）離心后溶液分成上層水相（含 RNA）和深色的下層沉淀（含蛋白質(zhì)、DNA、多糖等雜質(zhì)），小心吸取 500 μL上清液到一個(gè)新的 RNase-free 1.5 mL離心管中。
取上清，注意盡量不要吸取到下層的沉淀
3）加入 500 μL異丙醇，混合均勻，13,000 rpm (11,750 g) 離心 10 分鐘，棄上清。
加入異丙醇離心后，棄上清，取沉淀
4）加入 1 mL 75% 乙醇，溫和地翻轉(zhuǎn)離心管 4~6 次，11,000 rpm (8413 g) 離心 5 分鐘，棄上清。
如果觀察到 RNA 沉淀較多，可重復(fù)洗滌一次，以減少 RNA 中鹽分的殘留
5）棄去大部分上清后，短暫低速離心將殘留液體甩至管底，用 200 μL吸頭吸盡殘留的乙醇，保留管底及管壁的白色 RNA 沉淀。加入 50~100 μL RNase-free 水溶解 RNA，并將 RNA 儲(chǔ)存于 -70℃以下備用。
這樣，RNA提取就完成了，是不是快速又高效呢~
此等好物，如果你心動(dòng)了，就快來(lái)試一試吧！
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