Western Blotting即蛋白質(zhì)印跡,是分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中常用的一種實(shí)驗(yàn)方法。其基本原理是通過特異性抗體對(duì)凝膠電泳處理過的細(xì)胞或生物組織樣品進(jìn)行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中的表達(dá)信息,現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于基因在蛋白水平的表達(dá)研究、抗體活性檢測(cè)和疾病早期診斷等多個(gè)方面。
技術(shù)路線:
操作步驟:
1. 蛋白樣品制備及含量測(cè)定。
2. SDS-PAGE電泳。
3. 轉(zhuǎn)膜及免疫反應(yīng)。
4. 化學(xué)發(fā)光,顯影,定影。
5. 凝膠圖象分析:拍照、半定量分析
服務(wù)要求:
1. 樣本要求:
1.1請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料:
組織樣本:≥50mg;
細(xì)胞樣本:≥106個(gè);
抗凝全血樣本:2-5ml。
1.2或者不低于上述質(zhì)量的蛋白裂解液,我們會(huì)對(duì)蛋白裂解液進(jìn)行質(zhì)檢,質(zhì)檢合格方進(jìn)行正常檢測(cè)。這里提醒您提前蛋白一定要加蛋白酶抑制劑(更有包括磷酸酶抑制劑)
1.3 如果是低溫保存的樣本,-20℃保存的樣本最好不要超過2個(gè)月,-80℃保存的樣本不要超過6個(gè)月,液氮保存的樣本不要超過1年。如果您的樣本超出上述時(shí)限,造成隨后的實(shí)驗(yàn)失敗,我們不承擔(dān)責(zé)任。(當(dāng)然,我們也并未肯定超出時(shí)限的樣本肯定實(shí)驗(yàn)失?。?。
2. 蛋白信息:
2.1請(qǐng)您提供背景資料,包括目的蛋白的分子量大小,是否膜蛋白,參考文獻(xiàn)等.
2.2請(qǐng)您提供一抗(包括一抗來源、稀釋倍數(shù)等),也可由我們?yōu)槟?gòu),我們代理多個(gè)品牌的國(guó)內(nèi)外抗體供您選擇。